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阻遏蛋白的活性受到小分子诱导的控制

2023.3.14
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zhaoqisun

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细菌对环境的改变必需作出迅速的反应。营养供给随时都可能发生变化,反复反常。要能得以幸存必需具有可以变换不同代谢底物的能力。单细胞真核生物也同样生活在不断变化环境中;而更为复杂的多细胞生物都具有一套恒定的代谢途径,而无需对外部环境作出反应。

在细菌中是很需要灵活性,也需要很经济,因为细菌遇到合适的环境就大量消耗营养对其本身也是不利的。在缺乏底物时就不必要合成大量相关的酶类,因此细菌产生了一种调节机制,即在缺乏底物时就阻断酶的合成途径,但同时又作好了准备,一旦有底物存在就立即合成这些酶。

特殊底物的存在导致了酶的合成,此现象称为诱导(induction)。这种类型的调控广泛存在于细菌中,在较低等的真核生物(如酵母)也有这种情况。E.coli的乳糖操纵子提供了这种调控机制的典型范例。

当E.coli生长在缺乏β一半乳糖苷的条件下是不需要β-半乳糖苷酶的,因此细胞中含量很低,大约每个细胞不高于5个分子,当加入底物后细菌中十分迅速地合成了这种酶,仅在2-3分钟之内酶就可以产生并很快增长到5000个分子/每个细胞。如在酶的浓度将达到细胞总蛋白的5-10%。如在培养基中除去底物,那么酶的合成也就迅速停止,恢复到原来的状态。

如果原来培养基中无乳糖,也无葡萄糖,那么细胞只在很低的基本水平合成β-半乳苷酶和透性酶。当加入Lac后,Ecoli的lac+ 细胞很快大量合成以上两种酶。进一步用32P标记mRNA作杂交实验(用λlac中的取得的DNA,与加入乳糖后不同时间内产生的32P-mRNA进行分子杂交)结果表明加入的乳糖能激发lac的mRNA的合成。lac mRNA极不稳定,其半衰期仅有3分钟,这个特点随着诱导很快的恢复。当诱导物一除去转录立即停止,在很短的时间内所有的lac mRNA即被降解掉,细胞内的含量恢复到基础水平。

β-半乳糖苷酶和透性酶合成是和lac mRNA同时被诱导的,但当除去诱导物时在细胞中β-半乳糖苷酶和透性酶要比lac mRNA稳定,因此酶的活性在一段较长的时间内保持被诱导水平。这种对营养供给发生改变作出迅速反应的调控类型,不仅提供了代谢新底物的能力,而且习惯于关闭在培养基中实然加入的一些成份的内部合成。比如E.coli的Trp的合成是通过Trp合成酶的作用。如果在细菌生长的培养基中加入Trp的话,那么立即停止Trp合成酶的生产。这种作用称为阻遏(repression)效应。它使细菌避免合成多余的物质。

在细菌中同时存在着诱导和阻遏的现象。诱导是细菌调节其分解底物供给生长的能力。阻遏是细菌调节其合成代谢产物的能力。无论是酶作用的小分子底物的调节,还是酶活性的产生,它们的启动是独自的,小分子底物称为诱导物(inducers)某些物质能阻止酶合成它们本身,此物质就称辅阻遏物(corepressors)。

诱导和酶阻遏是高度特异的,只有底物/产物或紧密相关的分子才能起作用,但小分子的活性并不依赖于和靶酶的相互作用。某些诱导物与β-半乳糖苷酶的天然底物(乳糖)相似,但并不能被酶分解,比如异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylthiogalactoside,IPTG)。其半乳糖苷键中用硫代替了氧,失去了水解活性,但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物与酶位点的亲和力相同,IPTG虽不为β-半乳糖苷酶所识别,但它是lac基因簇十分有效的诱导物。

能诱导酶的合成,但又不被分解的分子,称为安慰诱导物(gratuitous inducer)。由于乳糖虽可诱导酶的合成,但又随之分解,产生很多复杂的动力学问题,因此人们常用安慰诱导物来进行各种实验。它的存在表明一个重要的问题,就是这个控制系统必须具有某种成份,它不同于靶酶,能识别合适的底物;而它的这种识别相关底物的能力也不同于酶。

对诱导物作出反应的这种成份就是阻遏蛋白,它由lacI编码,其作用是控制lacZYA结构基同的转录,对环境作出反应。三个结构基因转录成单个的多顺反子mRNA。阻遏蛋白的活性状态决定了此启动子是否打开或关闭。在缺乏诱导物时,这些基因不能转录,因为阻遏蛋白是活性状态结合在操纵基因上。当诱导物存在时,阻遏物与之结合,变成为失活状态,离开操纵基因,启动子开始转录,起始于lacZ 5¢端,终止于lacA的3¢端。

诱导物如何控制阻遏蛋白的活性呢?阻遏物对于操纵基因有很高的亲和性,在缺乏诱导物时,阻遏物总是结合在操纵基因上,使得邻近的结构基因不能转录。但当诱导物存在时,它和阻遏物结合形成了一个阻遏物复合体,不再和操纵基因结合。


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