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背景黑可能有以下几个原因:1.没有封闭好,但这个可能很小2.一抗浓度太高,适当降低增加一抗稀释比例,你最好先做个titration,确定一个最佳的抗体稀释比例3.二抗孵育时间太长,一般室温45min,二抗切不可孵育时间太长