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关于逆转录酶的质量控制介绍

2023.3.22
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  1.切口酶:在与200单位酶37oC保温60分钟后,超螺旋质粒保留在90%以上。

  2.DNase测定:200单位酶与50ng3H-DNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于1%。

  3.RNase测定:200单位酶与50ng3H-RNA37oC保温60分钟,分解出的放射性低于3%。

  4.第一链cDNA的反应:在标准化的反应中,200单位酶催化从1mg1.2kbRNA或1mg7.5kbRNA将同位素掺入到cDNA中,通过放射自显影,对于1.2kb的RNA,产物cDNA是单一的、全长的条带。对于7.5kb的RNA产物有部分是全长的条带。用这二种RNA放射性转换到cDNA中有12%。

  5.RNaseH活性:200单位酶与polyA:polydT37oC保温60分钟,释放出的放射性要低于1%。

  6.物理纯度:在SDS-PAGE上>90%纯。储存缓冲液:20mMTris-HClpH7.5;200mMNaCl;0.1mMEDTA;1mMDTT;0.01%NP-40(一种去垢剂)和50%甘油。反应缓冲液:250mMTris-HClpH8.3;375mMKCl;15mMMgCl2;50mMDTT(以Part#M531A供应)。

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