照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液精密量取本品适量,用流动相A定量稀释制成每1ml中含8.3g的溶液。对照品溶液取鲑降钙素对照品适量,精密称定,加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含8.3μg的溶液。系统适用性溶液取降钙素C对照品适量,加流动相A溶解并稀释制成每1ml中含0.01mg的溶液,取100l与对照品溶液900l混匀,即得。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂( Vydac6mm×250mm,5m,孔径300A或效能相当的色谱柱);以0.02mol/L四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节pH值至2.5)乙腈(9:1)作为流动相A,以0.02mol/L四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈(2:3)作为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为220nm;进样体积200l时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)21.01系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,理论板数按鲑降钙素峰计算不低于5000,降钙素C峰(与鲑降钙素主峰的相对保留时间为0.5~0.6)与鲑降钙素峰间的分离度应大于测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪(进样前用供试品溶液和对照品溶液1m1分别润洗进样瓶1分钟,重复两次),记录色谱图。按外标法以峰面积计算。
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