影响柱效的因素如下:
1、凝胶本身性质:
每一种凝胶均有其合适的分离范围,应选择合适的凝胶进行分离。同样分离范围的凝胶颗粒越细的,柱效越高。
2、色谱柱装填的好坏:
凝胶过滤色谱柱装填完后,一般可以用丙酮(或NaCl)测定柱效和峰对称性,一般对于平均颗粒直径在30~34微米的Superose PG、Superdex PG系列凝胶,柱效应在9000以上,而颗粒平均直径在90微米的Sepharose FF凝胶柱效应在3000以上。通常,越是分辨率高的细颗粒凝胶对于装柱的技术要求越高。
柱效:
柱效简而言之就是色谱柱对色谱中两种物质分离能力的大小。柱效越高,分离效果越好,峰形越好,反之则分离效果差,峰形差,甚至不能完全分开两个物质。色谱柱的柱效和填料、柱长、柱内径均有关系,一般来说,填料越细密、柱长径比越大,柱效越高。
在HPLC中,柱效一般出厂后就基本固定,随着使用过程的损耗而柱效降低。人工填柱的色谱柱,因为每次装柱时所用的溶液、填料量都不尽相同,因此柱效也会有变化。测柱效主要是看柱是否具有良好的分离效果。柱效的衡量用塔板数表示。