尿激酶的含量测定方法

酶活力牛纤维蛋白原溶液取牛纤维蛋白原,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解并稀释制成每1ml中含6.67mg可凝结蛋白的溶液牛凝血酶溶液取牛凝血酶,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解并稀释制成每1ml中含6.0单位的溶液。牛纤维蛋白溶酶原溶液取牛纤维蛋白溶酶原,加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.0)溶解并稀释制成每1ml中含1~1.4酪蛋白单位的溶液(如溶液浑浊,离心,取上清液备用混合溶液临用前取等体积的牛凝血酶溶液和牛纤维蛋白溶酶原溶液,混匀。标准品溶液取尿激酶标准品,加巴比妥-氯化钠缓冲液H7.8)溶解并定量稀释制成每1m1中约含60单位的溶液。供试品溶液取本品适量,精密称定,加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)溶解,并定量稀释制成与标准品溶液相同浓度的溶液,摇匀。测定法取试管4支,各加牛纤维蛋白原溶液0.3ml,置37C士0.5℃水浴中,分别加巴比妥-氯化钠缓冲液(pH7.8)0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml,依次加标准品溶液0.1ml0.2ml、0.3ml、0.4ml,再分别加混合溶液0.4ml,立即摇匀,分别计时。反应系统应在30~40秒内凝结,当凝块内小气泡上升到反应系统体积一半时作为反应终点,立即计时。每个浓度测3次,求平均值(3次测定中最大值与最小值的差不得超过平均值的10%)。以尿激酶浓度的对数为横坐标,以反应终点时间的对数为纵坐标,进行线性回归。供试品按上法测定用线性回归方程求得供试品溶液浓度,计算每1mg供试品的效价(单位)。蛋自质含量取本品约10mg,精密称定,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定,即得比活每1mg蛋白中含尿激酶活力单位数