固定发射波长，用不同波长的激发光激发样品，记录下相应的荧光发射强度，即得激发光谱。
荧光的相对强弱，与很多因素有关，可用（1）式表示：式中F表示荧光强度，K是仪器常数，Φ为荧光量子产率，I0是激发光强度；ε是样品的克分子消光系数；b为样品池的光径长度；c为样品浓度。当浓度很稀时（1）式可近似为（2）式：
从此式可知，在低浓度等件下，样品浓度和荧光强度呈线性关系。 用τ表示荧光寿命，并以（4）式定义之：（4）
该式表达了荧光物质被一瞬时光脉冲激发产生的荧光随时间的衰减。荧光寿命τ就是荧光强度下降到最大荧光强度F0的1/e时所需要的时间。
荧光偏振常用偏振度表示，其定义如（5）式：
式中F∥表示激发光起偏器和荧光检偏器的透射轴方向平行时测得的荧光强度；F⊥是上述两方向互相垂直时的荧光强度。当 P=0时，说明完全不偏振；P在-1至+1之间即为部分偏振。
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