组成核酸分子的碱基,均具有一定的吸收紫外线特性,最大吸收值在波长为250~270nm之间.核酸的最大吸收波长是260nm,这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础.
在波长260nm紫外线下,1OD值的光密度相当于双链DNA浓度为50μg/ml;单链DNA或RNA为20μg/ml.可以次来计算核酸样品的浓度.
分光光度法不但能确定核酸的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的紫外线吸收值的比值(A260/A280)估计核酸的纯度.DNA的比值为1.8,RNA的比值为2.0.若DNA比值高于1.8,说明制剂中RNA尚未除尽.RNA、DNA溶液中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.当然也会出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况,所以有必要结合凝胶电泳等方法鉴定有无RNA.或用测定蛋白质的方法检测是否存在蛋白质.紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液.对于很稀的溶液可采用荧光光度法.
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