差异验证方法全解

本篇文章是差异蛋白主题系列的最后一篇，之前的内容可以点击以下链接查看：

【老生常谈】P值是如何来的！

【REVIEW】你从哪里来，差异蛋白！

终于找到你 | 挑选差异蛋白攻略大全

定量蛋白组学技术，包括非标记的定量蛋白质组学（Label-free定量）和体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术（iTRAQ定量），可以筛选两组样本（实验组和对照组）之间的差异蛋白。差异蛋白质也有了，生物信息学分析也做了，是否发文章就万无一失了呢？NO!NO!NO!还是那句话，经得起考验的才是真爱啊。所以如果有发表文章的需求的您，强烈建议您对结果进行验证，具体原因可以查看之前发的：【老司机切磋】蛋白质组学与验证，您所关心的问题都在这里 。

好奇的您要问了，那选择哪一种验证方法呢？目前，随着科学技术的发展，生物学也迎来了日新月异的时代，在技术层出不穷的时候，如何进行验证，今天我们就为您总结一下。

1.    PRM验证。PRM也是大家的老朋友了，生物质谱平行反应监测技术（简称PRM），  它是对复杂混合物中目标蛋白质进行准确质谱检测的技术手段。PRM作为一种蛋白质谱检测的方法，具有特异性强、灵敏度高、准确度高、重现性好、线性动态范围宽、自动化高通量的突出优点，是目前最灵敏的质谱检测模式，被誉为蛋白质谱分析的“金标准”，其技术应用之一就在于可以进行差异蛋白后续验证。相比以上几种验证方式，能兼顾以上方法的缺点，并且通量更高的验证小能手也非PRM莫属了。在经常在编审的评审意见中也经常推荐使用PRM验证的方法啦。所以还不知道什么是PRM的童鞋，请戳链接去学习一下。

新神器来袭：PRM技术——蛋白质组学验证，无缝对接！！

2.    WB验证。目前确实很多文章是用的该方法来进行的验证，但是需要准备特异性的抗体，而且，有越来越多的文献提到，WB不足以验证质谱鉴定到的差异蛋白。因为WB实验是级联放大效应，针对组与组之间表达差异比较大的蛋白，可能会有比较好的验证效果。但如果是质谱鉴定出来有差异，但是是差异比较小蛋白，WB经常是验证不出来的。另外大家要注意了，抗体验证前提是要有抗体噢，但是市面上的抗体种类不可能覆盖所有的蛋白质种类，所以可能还需要先合成您所需要的个性化抗体才可以噢，这个成本和时间可是大大滴。所以WB验证也不是万能的方法哟。

3.   酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）: 利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答。定量的结果可以根据标准曲线的制定，结合吸收度值进行定量结果的判断。但是ELISA试验要选择适合的Kit才能的到比较可信的结果呢。

4.  RT-PCR验证。如果核酸水平与蛋白水平有一致的改变，那可以使你的结果锦上添花，如果核酸水平无变化，你反而还要花力气去研究其原因，或给出解释。所以RT-PCR验证属于不同的层面的验证，不一定是一致的结果。试验操作较为简单，成本相对较低，但是如果有不一致的结果也不要奇怪噢，有可能就是这样的。

为方便大家开展实验，缩短周期，节省成本，全程无忧，中科新生命特地推出了非靶蛋白组+PRM的打包服务，目前还有买一送一的优惠活动，需要的朋友们赶紧行动起来吧！

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