化学发光免疫分析
(ChemiLuminescence ImmunoAssay, CLIA)
一、定义:
化学发光是一种特异的化学反应,有机分子吸收化学能后发生能级跃迁,产生一种高能级的电子激发态不稳定的中间体,当其返回到基态而发出光子,即为化学发光。将化学发光与抗原抗体相结合而形成的免疫分析技术,即为化学发光免疫分析。
二、分类:
根据发光原理的不同,主要可分为化学发光免疫分析(CLIA)和化学发光酶免疫分析(CLEIA)两种。
CLIA |
CLEIA |
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原理 |
用化学发光物质直接标记抗原或抗体 |
在酶免疫分析完成后加入化学发光底物,产生化学发光 |
发光类型 |
闪光型 |
辉光型 |
标记物 |
吖啶酯(acrydinum esters) |
1.辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2/Luminol系统;2.碱性磷酸酶(AP)/1,2二氧乙烷稳定衍生物(AMPPD)系统 |
发光时间 |
零点几秒到几秒 |
几分钟到几小时 |
测量仪器 |
全自动化加样及测量仪 |
通用型仪器 |
另外,最近建立了一种偶合放大化学发光酶联免疫分析法(ECLIA),尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光,但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合。