流动相添加剂对基线噪音的影响

流动相添加剂对基线噪音的影响

流动相在使用之前确保经过脱气处理，使用未经脱气处理的流动相，基线波动比较厉害，噪音水平较高，有时也会出现鬼峰。下图比较了脱气与否以及脱气方式对于基线噪音的影响。

在对一些极性可解离化合物进行HPLC分析的时候，往往需要向流动相中添加有机酸碱改性剂，如TFA等。在使用有机添加剂的时候，最好是在水相以及有机相中均添加的方式，避免由于有机添加剂混合不均匀导致的色谱基线噪音过大的情况发生。

TFA在水中的紫外吸收光谱与在乙腈中的紫外吸收光谱存在差异，因此在梯度洗脱时，基线的形状随梯度设置以及检测波长设置的不同，而呈现出不同的形状。特别地，当起始有机相比例比较低(如10%以下)，梯度斜率又比较大的时候，如下图7所示，流动相B从5-95%(20min)，检测波长设置为210 nm(图7A)与254 nm(图7B)时，在使用TFA作为有机添加剂的时候。在210 nm检测波长下，色谱基线在3.5-5 min内出现了一个较大的上扬，在254 nm的检测波长下，该现象不明显。

上图的这种现象，总的来说与以下几个方面有关：(1)色谱柱键合相的碳链长度，C18 > C8 > C4；(2)有机相起始比例，起始比例越高，越不明显；(3)TFA的浓度，浓度越大越明显；(4)泵的冲程大小，冲程越小越不明显；(5)检测波长，越大越不明显；(6)混合器的体积，越小越明显。

此外，在使用强紫外吸收的添加剂的时候，注意对色谱图上的系统峰进行区分。如下图8A所示，0.1%TFA水以及乙腈为流动相，分别进样比起始流动相洗脱强度弱/强的0.1%TFA溶剂，1-2 min内的正负峰均为系统峰。特别的，当使用其他保留比TFA强的添加剂的时候，如HFBA，需要注意进样之后引起的系统峰，如下图8B中峰1以及峰2均为系统峰且峰1与峰2的面积和理论上为零。