高速逆流色谱结合大孔树脂从龙胆中分离高纯度龙胆苦苷

[摘要] 　目的:建立龙胆中高纯度龙胆苦苷的快速分离制备方法。方法:药材醇提取液经D101大孔吸附树脂柱的层析物直接进行高速逆流色谱( high2speed counter2current chromatography, HSCCC)分离纯化,以醋酸乙酯-正丁醇2水(2∶1∶3)为溶剂系统,下相为流动相,流速115 mL·min- 1 ,检测波长254 nm,分离温度30 ℃,所得产物经高效液相色谱与质谱分析检测,并与标准品对照。结果:在此条件下,经一步分离从300 mg粗提物中得到136 mg纯度为9916%的龙胆苦苷。结论:该法简便、快速、所得产物纯度高,适合于龙胆苦苷标准品的制备。
[关键词] 　龙胆;高速逆流色谱;大孔树脂;龙胆苦苷

    龙胆为龙胆科植物龙胆Gentiana scabra Bge. 、条叶龙胆G. m anshurica Kitag. 、三花龙胆G. trifloraPal1. 、坚龙胆G. rigescens Franch. 的干燥根及根茎,性寒、味苦;归肝、胆经;具有清热燥湿、泻肝胆火的功效[ 1 ] 。近年来用于健胃、抗肿瘤、治疗急慢性肝炎、乙型脑炎等疾病亦取得良好疗效[ 2 ] 。龙胆中主要的化学成分是裂环烯醚萜类化合物,如龙胆苦苷( gentiop icrin) 、獐牙菜苦苷( swertiamarin) 、獐牙菜苷( sweroside)等,其中龙胆苦苷是龙胆的主要有效成分。目前分离制备龙胆苦苷多采用传统硅胶柱色谱法或聚酰胺柱色谱法[ 3 ] ,这些方法不仅费时费力、污染环境,而且所用固定相对样品有不可逆性吸附作用。高速逆流色谱(HSCCC)是一种较新型的液液分配色谱技术,它不用任何固体支撑体或载体而克服了传统分离方法对样品的不可逆性吸附作用,
因而样品回收率高,同时还具有应用范围广、仪器操作简单、分离量大等优点[ 4, 5 ] 。本研究中采用溶剂提取和大孔树脂柱色谱得到粗提物,以此粗提物直接进行HSCCC分离纯化,经一步洗脱分离得到纯度高于99%的龙胆苦苷,该法操作简单、快速、产物纯度高。目前,尚未见快速、简便制备高纯度龙胆苦苷的报道。