实验方法原理 | 细菌处于0℃,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过42°C短时间的热击处理,促进吸收DNA,然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中,于37℃摇床培养过夜(250 r/min)。
4. 细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2溶液重悬,于4℃,以1 100 g 离心5 min 。
6. 用2 ml 冰冷的CaCl2溶液重悬各管细胞,然后按每管250 ul 的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中,立即冻存于- 70℃。
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注意事项 | 1.转化菌涂平板前抗生素的量要足够,涂布细菌时菌量不要太多,培养时间不要超过16小时。否则抗生素会失效,未转化菌也会生长。 2.制备感受态细胞的过程中,每一步操作的动作要轻柔,尤其是悬浮细胞时要避免用旋祸混合器。 3.所用的CaCl2等试剂均需是最高纯度的,并用最纯净的水配制,最好分装保存于4℃。 |