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脂质体介导的真核细胞转染实验——哺乳动物细胞选择标记

2019.3.25
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

哺乳动物细胞的选择标记

实验材料

哺乳动物

实验步骤

一、腺苷脱氨酶（ADA）

 

1.  选择条件：培养液中加10 μg/ml 胸腺嘧啶脱氧核苷，15 μg/ml 次黄嘌呤，4 μmol/l 腺嘌呤-9-β-D-呋喃木糖苷（Xyl-A），及0.01~0.3 μmol/l 2‘-脱氧助间型霉索（dCF）。胎牛血清中含有ADA可解除培养液的毒性，所以在用前才加入培养液中。

2.  选择原理：Xyl-A可转化成Xyl-ATP并掺入核酸中，从而导致细胞死亡。Xyl-A被ADA解毒成为其肌苷衍生物，dCF是ADA过渡态类似物，因而可以灭活母代细胞内源性的ADA，内源性ADA的水平因细胞不同而异，因此dCF的合适选择浓度也随之变化。

 


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