分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

粘粒和质粒克隆的纯化实验

2019.3.26
头像

zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。


实验材料

质粒

试剂、试剂盒

LB抗生素

仪器、耗材

涂布棒硝酸纤维滤膜

实验步骤

1.  通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。

2.  用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。

3.  取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37℃培养过夜，在直径100 平板上长出25~250个菌落为宜。

4.  将菌落影印在硝酸纤维素滤膜上，变性、复性、烤膜和杂交化。

 

5.  对照次级平板的放射自显影结果，挑选独立的阳性克隆，培养扩增后分离质粒或粘粒的DNA。



纯化实验
互联网
仪器推荐
文章推荐