述方案是 Dilworth 和 Huang 方案的修改(DilworthandMcCarey1992;Huangetal.2000)。它可以用于从大多数商用试剂盒和试剂制备的 RNA 中去除 DNA 污染。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。
试剂、试剂盒 | EDTADNA 酶ⅠDNA 酶Ⅰ缓冲液RNA 样品 |
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仪器、耗材 | 水浴锅 |
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实验步骤 | 一、材料
1. 缓冲液、溶液和试剂
用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水
EDTA,25 mmol/L
2. 酶和酶缓冲液
DNA 酶Ⅰ, 扩增级(无 RNA 酶)
DNA 酶Ⅰ缓冲液,10X
3. 核酸和寡核苷酸
RNA 样品
4. 特殊设备
水浴,预设为 65°C
二、方法
①向一无 RNA 酶的管中加下列成分。
RNA 不多于 80ug
DNA 酶 I 缓冲液,10X 1ul
DNA 酶 I(lU/ul) 1ul
用 DEPC 处理过的水将总体积调到 10ul。
②室温下温育 15 min。
③加 1ul25 mmol/L 的 EDTA 溶液,并于 65°C 加热 10min 以灭活 DNA 酶 I。
用这种方式处理的样品适合直接用于 RT-RCR。 |
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