实验方法原理 | 根据离子交换原理,将经硫酸铵粗提的含McAbγ球蛋白上样结合于层析柱上,通过增加洗脱液中的离子强度,洗脱并收集蛋白峰。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 腹水10000 g离心10 min,除去细胞和杂质,在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液,使终浓度为40 %饱和硫酸铵搅拌20~30 min
4. 洗脱流速1 ml/min 0~1 min:0→5%缓冲液B(20 mM Tris,PH8.5,含2.0 M醋酸钠) 1~20 min(线性梯度洗脱):5→20%缓冲液B 20~22 min:20→0%缓冲液B
5. 洗脱液用紫外280 nm进行监测
6. 收集蛋白峰,进行含量、纯度和活性测定 展开 |
注意事项 | 1. 所用缓冲液和加样粗提物均需0.22 μm滤膜过滤。
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