| 实验方法原理 | 有些有机溶剂（如苯、甲苯）、抗生素、表面活性剂（SDS、Triton X-100）、金属整合剂（EDTA） 、变性剂（盐酸胍、脲）等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性，使内含物有选择地渗透出来。这种处理方式就是化学渗透法。本文仅以表面活性剂 Triton X-100 为例简要介绍如下。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 用缓冲盐液（TBS：10 mmol／L pH7.5 Tris-HCl，150 mmol／L NaCl） 4℃：洗细胞几次； 2. 离心除去缓冲盐液，在 含 0.1 ％～0.3 ％ Triton X-100 的缓冲盐液（TBS） 中混悬细胞（107～ 108 细胞／ml 或总蛋白 3 ～ 4 mg／ml）； 3. 混旋或颠倒试管几次后，冰浴中孵育 10 ～60 min。 |
| 注意事项 | 1. 低浓度表面活性剂处理。如能充分溶解细胞，则它是很温和的方法。 2. 若目的蛋白不稳定，冰浴中孵育时间可以减少甚至取消；裂解液内加入 0.2 倍体积 50％ 甘油也可以稳定目的蛋白。 3. Triton X-100 以外的表面活性剂也可以用。 4. 此法主要用于溶解培养的动物细胞。 展开 |
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