免疫球蛋白标记技术_125I标记单克隆抗体技术

McAb125I

磷酸缓冲液氯胺桾偏重亚硫酸钠KIBSA

超净台γ计数仪PD10柱

1.  在细胞冻存管内加入纯化的McAb100 μg/100 μl，再加入10 μl 0.05 M磷酸缓冲液，再加入10 μl（含1 mCi）¹²⁵I

2.  加入10 μl氯胺-T（5 mg/ml溶于0.05 M磷酸盐缓冲液），孵育时间不超过30秒

3.  加入100 μl偏重亚硫酸钠（1.2 mg/ml溶于0.05 M磷酸缓冲液）

4.  加入200 μlKI溶液（少许结晶KI溶于0.05 M磷酸缓冲液＋4 ％牛血清白蛋白）

5.  用PD10柱（Sephadex G25）除去游离¹²⁵I。用4 ％BSA、PBS洗脱

6.  分部收集，0.5 ml/管。每管取5 μl进行γ计数，计算标记抗体的比活性和标记率
 

　　　　　 结合于McAb¹²⁵I放射性强度（cpm）

标记率（％）＝───────────────────

　　　　　　　　　总放射性强度（cpm）

　　　　　　　　　　
　　　　　　
                                 结合于某一管McAb上的放射性强度

比活性（μCi/μgMcAb）＝────────────────

　　　　　　　　　　　　　某一管McAb总量

1.  严防同位素污染，工作人员必须穿着工作衣，戴口罩、帽子、手套。必须在严密的通风橱或通风超净台中操作。操作前后对实验室环境进行监测。所用¹²⁵I和标记物应妥善保管。

　
2.  如标记细胞因子、激素等，应选用更温和的标记方法，使保持更好的生物学活性。