实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 加 10~20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1 ml 0.1%(m/V)BSA/0.02%(m/V)NaN3 中,置于冰上。 2. 加 1 ml 冷冻的 10%(m/V)TCA 溶液。剧烈振荡混匀,在冰上孵育 30 min。 3. 在真空滤过装置内,滤过细胞悬液到 2.5 cm 玻璃微纤维滤膜上。 4. 用 5ml 冷冻 10%TCA 溶液洗膜 2 次,再用乙醇洗 2 次。空气干燥 30 min。 5. 在玻璃微纤维滤膜上点同样体积(见步骤 1,10~20 μl)的放射性标记的细胞悬液,在空气中干燥。 6. 转移滤膜到 20 ml 闪烁管里,加 5 ml 闪烁记数溶液,用闪烁记数仪测定放射活性。 7. 计算 TCA 沉淀标记(见步骤 4)与总放射活性的比值(见步骤 5)。 展开 |
注意事项 | 1. TCA 有强烈腐蚀性。在制备和操作 TCA 溶液时注意保护眼睛并避免皮肤接触。 2. 洗液应按照混合化学/放射性废弃物处理。根据安全规程进行处理。 |