金属硫蛋白(metallothionein)是由由微生物和植物产生的金属结合蛋白,富含半胱氨酸的短肽,对多种重金属有高度亲和性。它是分子质量较低,半胱氨酸残基和金属含量极高的蛋白质。与其结合的金属主要是镉、铜和锌,广泛地存在于从微生物到人类各种生物中,其结构高度保守。
实验方法原理 | MT是一种低分子量的蛋白质,含有大量的半胱氨酸,并对金属有较高的亲和性。 |
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实验材料 | 牛血红蛋白 |
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试剂、试剂盒 | 氯化镉Tris-HCl蔗糖 |
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仪器、耗材 | 分光光度计离心机 |
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实验步骤 | 一、实验步骤
1. 组织按1:4(w/v)加入0.25 mol/l 蔗糖溶液,制备匀浆,18 000 g离心20 min(4℃)。
2. 取上清液0.5 ml,加入1.9 ml 0.03 mol/l Tris-HCl缓冲液(pH8.0)。
3. 再加入1 ml CdCl2(10ppm)混匀,室温孵育5 min。
4. 加入2%牛血红蛋白0.2 ml,沸水浴1 min,室温离心1 000 g,5 min。
5. 反复加入牛血红蛋白,加热、离心3次。
6. 在原子吸收分光光度计,用石墨法测定上清液Cd含量。
7. 组织MT含量按6 g原子Cd结合可分子MT计算。
8. 按Bradford 法测定上清液中的蛋白质含量。 展开 |
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