用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验2

2019.4.03

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实验材料	2〜4代的间质细胞
试剂、试剂盒	PBSA BSA：PBSA+0.5%BSA PBSA 2FB:含2%FBS的PBSA 封闭缓冲液抗体：MAB4155F 克隆5D3抗ABCG2-FITC 或同型抗体-FITC
仪器、耗材	具有488 nm氩激光器和525 20带通滤波器的高速细胞分选仪
实验步骤	(a)胰蛋白酶消化2〜4代的细胞并计数。 (b)400g离心，10min。 (c)PBSA/BSA洗一遍。 (d)加入10μL抗体（MAB4155F、克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC),30 min，置于冰上。 (e)用PBSA/BSA洗一遍后离心。 (f)用高压高速的细胞分选仪进行流式细胞分选术。488nm的氩激光发生器用于激发荧光素异硫氰酸盐，525/20带通滤波器用于测量发射光。用侧向散射对前向散射的双参数图上的门来除外细胞碎片。收集至少100000个细胞用于分析。 (g)分选出的ABCG2阳性和阴性的细胞群可以用于检测它们的集落形成率，干细胞标志性基因的表达，以及继续传代用于更进一步的研究和体内移植等。展开

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