实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 |
一、将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2-3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部,取胎鼠带入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏,置平皿中。 二、用Hank's液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。 三、用手术剪将肝脏剪成小块(1 mm2),再用Hank's液洗三次,转移至小青霉素瓶中。 四、将组织块转移到培养瓶,贴附与瓶底面。 |
注意事项 | 1. 严格进行动物皮肤消毒,使用三套器械取材。新生动物皮肤先用2%碘酒液消毒,成年鼠先用3%~5%碘酒液消毒后用75%酒精消毒。
2. 严格进行无菌操作,防止细菌、霉菌、支原体污染,避免化学物质污染。
3. 吸取液体前,瓶口和吸管进行火焰消毒;吸取液体时,避免瓶口和吸管碰撞。
4. 离心管入台前,管口、管壁应消毒。
5. 实验者离开超净台时,要随时用肘部关闭工作窗。
6. 使用过的器械用酒精棉球擦去血污后,移入另一个器皿中继续消毒,在浸泡器械时剪刀口要叉开放,镊子弯头要向下放,并加盖消毒。
7. 器材使用时既要注意用火焰消毒,又要防止烫伤、烫死细胞。经火焰消毒后的吸管一定要用Hanks液冷却。
8. 超净台内温度、湿度较大,在夏天工作时台内散热更慢,因此进行细胞悬液混匀、接种时,离火焰要稍微远些。 展开 |
其他 | 一、操作要领 (1)火焰消毒吸管,用Hank's液冷却和湿润管内壁(这是因为刚分离的组织细胞易粘在管壁上)。 (2)吸管头插入管底。 (3)用吸管反复轻轻吹打组织块。 2. 器械的使用 (1)用工作台消毒镊子取浸泡在酒精中消毒的器械。 (2)器械置无菌干纱布内嚓一下。迅速通过火焰,冷却后使用。 (3)用过的器械置另一加盖的器皿中再消毒。 (4)器械按浸泡消毒的顺序使用。 (5)各套再消毒器械不可混用。 3. 除去组织块多余水分 用吸管将组织块推向青霉素瓶一角,然后将有组织块的瓶面翻向上方,吸去流向对侧的多余水分。 注意:多余水分若不除去,会使组织块剪切不细,消化后的细胞悬液清亮(细胞数少),并可见消化液中有线状或絮状物漂浮。 4. 细胞计数 (1)用吸管混匀待计数的细胞悬液。 (2)将一小滴细胞悬液从盖玻片与载玻片交界部位滴入细胞计数池中。 (3)沉降1分钟,低倍镜下计数血球计数板四大中格的结构完整的细胞,小细胞团计数为1。 (4)计数时,如果细胞压在格上,则数上不数下,数左不数右。然后按下式计算出每毫升悬液中的细胞数。 (四大中格细胞数/4)*10 000=细胞数/毫升 展开 |