人软骨祖细胞的分化
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | (a)从培养瓶中吸出生长培养基弃之。 (b)PBSA润洗后弃去洗液。 (c)加人足量的胰蛋白酶/EDTA覆盖培养瓶底。 (d)在37℃孵育5〜10 min(在显微镜下观察细胞是否脱落) (e)重悬细胞,置于15 ml离心管中,300g离心5min。 (f)用1ml生长培养基洗涤,转移至普通器皿或离心管中。 (g)用血细胞计数板对细胞进行计数。 (h)重复离心(620g,10min),弃去上清液。 (i)用分化培养基将其稀释到1×106个细胞/ml。 (j)按1 ml/管分装到新Eppendorf管中。 (k)300g离心5 min,上清保留不动。 (l)置于37℃孵箱。 (m)每2〜3天更换培养基(见下面的注解1) (n)培养2〜3周软骨生成(见注解2) 展开 |
注意事项 | 注解 (1)前几次更换培养基要格外小心,因为只有少量基质将沉淀聚集在一起,操作时很容易分散沉淀。 (2)虽然我们在这里集中阐述的软骨生成,但适当的培养基也可用来诱导其他表型。无论沉积培养还是单层细胞培养,我们都成功地使牛软骨祖细胞获得了成骨、成脂肪和成神经的表型。 |