实验步骤 | 1. 主要试剂的配制 碘化丙锭贮存液:100 μg/ml,4℃ 避光保存。Hoechst 33258 贮存液:100 μg/ml,4℃ 避光保存。 2. 操作流程 2.1 常规制备单细胞悬液(方法同 PI 染色法),加入 Hoechst 33258 溶液,使其终浓度为 1 μg/ml,37℃ 孵育 7 min,离心后弃染液,用PBS重悬。 2.2 加入 PI 染液,使其终浓度为 5 μg/ml,置冰块上片刻,离心弃染液,用 PBS 洗 1 次后,即可上机检测,紫外激光记录 400~500 nm 处蓝色荧光和 >630 nm 处红色荧光。 3. 结果观察 正常对照细胞呈弱蓝色及弱红色荧光,凋亡细胞呈蓝色及弱红色荧光,死亡细胞呈强红色及弱蓝色荧光。 |
---|