与多克隆抗血清相比,采用单克隆抗体(MAb)的最主要的优势就是有可能得到大量的特异性单克隆抗体可供应用。MAb 制剂通常包括杂交瘤上清、由接种了杂交瘤的小鼠制备的腹水,以及纯化的 MAb。杂交瘤上清容易制备,特别是用于制备大量不同的 MAb , 但其中 MAb 的浓度则相对较低。为得到纯化的制剂,可以把培养上清或腹水拿来进行亲和层析。绝大多数培养上清可达到饱和的 MAb 滴度,即取 100 ml (10 5 个细胞)测试时其滴度超过 1:10。经过亲和层析,可期望得到 1~10 mg/L 的纯化的 MAb。
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm2 组织培养瓶中,放入 37℃ CO2 培养箱,直至生长旺盛适于分传。 2. 按 1:10 的比例将细胞分传到一个新的 175 cm2 的培养瓶中,加入完全 DMEM-10 培养液到总体积为 100 ml,并置 37℃ CO2 培养箱中直至细胞过度生长,此时溶液变酸(变黄色),细胞死亡(约 5 天)。 3. 将培养瓶中的内容物转移到无菌的 50 ml 的锥形离心管中,室温下 1500 g 离心 10 min, 收集上清。用 ELISA 法或用流式细胞仪检测 MAb 上清的滴度。 4. 将上清无菌保存,在 4℃ 时通常可稳定地存放数周至数月;在 -20℃ 时可存放数月至数年;-70℃ 时可永久保存。分装成数份冻存。尽量避免反复冻融。 展开 |
注意事项 | 当细胞密度达到 1×106~2×106 细胞/ml 时,大多数细胞系需要分传至新的培养液或新的培养瓶中。监控组织培养瓶中的细胞活度、污染及密度。细胞不能长得过密,否则会死亡,这种细胞濒死的状况会增加细胞表型改变的可能性。 |
其他 | 如果上清滴度很高,则该杂交瘤可用于大规模纯化制备或用以产生腹水。 |