实验方法原理 | 火箭电泳(rocketimmunoelectrophoresis)又称单向定量免疫电泳,将抗原样品放在含有专一性抗体的凝胶孔中,抗体静电荷为零不移动;而抗原分子在电场作用下移动,形成抗原-抗体复合物沉淀下来。后面的抗原继续向正极泳动遇到沉淀的抗原-抗体复合物,抗原过量使复合物沉淀溶解,与未结合的抗体结合,又形成新的抗原-抗体复合物沉淀下来,不断沉淀-溶解-再沉淀,最后形成锥形的沉淀峰,称火箭电泳。其高度与所加抗原的量大致成比例。 (来源:生物化学与分子生物学实验指导,邵雪玲等,武汉大学出版社,2003) |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 抗体琼脂板的制备 |
注意事项 | 如果精确计算,可用求积仪测定峰的面积。影响单向定量免电泳的因素很多,主要是要选择好抗体浓度,使抗原抗体浓度比例合适。这就需要根据免疫血清的效价来定所加入琼脂中的抗体量,如效价高,则免疫血清琼脂的比例为1∶5~9,如效价低;;则免疫血清与琼脂的比例为2∶5。另外,抗原含量也要注意,过高过低都影响火箭峰形。如抗原含量过低,则峰形太矮,如抗原浓度过高,则火箭峰不封口。如抗原抗体量合适,泳动的距离大约为2~5 cm。 |