对流免疫电泳实质上是定向加速度的免疫双扩散技术,其基本原理是:在琼脂板上打两排孔,左侧各孔加人待测抗原,右侧孔内放人相应抗体,抗原在阴极侧,抗体在阳极侧。通电后,带负电荷的抗原泳向阳极抗体侧,而抗体借电渗作用流向阴极抗原侧,在两者之间或抗体的另一侧形成沉淀线。
实验方法原理 | 对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10~15倍。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 琼脂板的制备根据需要可选用大玻板(6厘米×9厘米)和(小玻片)两种。大玻板约需琼脂10毫升,小玻片约需3.5毫升,凝固后按图打孔,方法同琼脂扩散试验。
图5 对流免疫电泳抗原孔、抗体孔位置示意图 3. 电泳 用国产普通电泳仪。其内加0.05 m PH8.6的巴比妥缓冲液,加至电泳槽高度的三分之二处,注意两槽内液面尽量水平。将加好样品的玻板置于电泳槽上,抗原端接负极,抗体端接正极,用2~4层滤纸浸湿作盐桥,滤纸与琼脂板联接处为0.5厘米。以板宽度计算电流,以板的长度计算电压。要求电流量为2~3毫安/厘米,即大板为20毫安,小板为10毫安。电压为4~6伏/厘米。通电45分钟~2小时后观察结果。
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