实验方法原理 | 白细胞介素1是一种重要的细胞因子,主要由单核-巨噬细胞产生,IL-1不仅对多种免疫活性细胞有重要的调节功能,而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。 一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性 小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体,在有IL-1同时存在的条件下,IL-1可协同丝裂原促T细胞的增殖作用。根据加入IL-1后增殖水平(3H-TdR掺入率)的增加可计算出样品中IL-1的活性单位,或计算出刺激指数。 二、应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性 小鼠胸腺瘤细胞系EL4的某些亚克隆细胞表面具有高密度IL-1受体,在IL-1诱导下产生高水平的IL-2,通过用IL-2依赖株CTLL-2检测IL-2的生物学活性,从而反映检测样品中IL-1的水平。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性
2. 细胞悬液内加入ConA,使终浓度为3 μg/ml,在96孔培养板中加100 μl(1.5×106细胞)
3. 加入不同稀释度待测样品和IL-1标准品100 μl/孔(ConA终浓度为1.5 μg/ml),37 ℃ CO2孵箱 66 h
6. 烤干,移入液闪瓶中,加适量闪烁液,于液闪仪上测β计数 实验组cpm 对照组cpm 二、应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性 1. 用EL4细胞两步法检测IL-1活性
(2)洗涤后,用1 %FCS RPMI1640重悬细胞,并调整细胞浓度2×106 /ml
(3)加处96孔板中,100 μl/孔
(4)加入不同稀释度的IL-1α或IL-1β,100 μl/孔,同时设1 %FCS RPMI 1640对照
(5)5 %CO2 37 ℃培养18~24 小时
(6)按终稀释度为1∶10~20转入另一块96孔板中
(7)用CTLL-2 检测IL-2活性、检测方法见"IL-2检测"
(2)加入96孔板中,两种细胞各加50 μl/孔
(3)加入不同稀释度的IL-1或待测样品,同时设EL4和CTLL-2细胞对照
(4)置5 %CO2,37 ℃培养24~28 小时后加入3H-TdR,0.5 μci/50 μl/孔,继续培养6~8 小时
(5)收集样品,β计数 展开 |
注意事项 | 一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性 1. 不同品系小鼠对IL-1的反应性有差异,据国内资料报道以C57BL为好。
2. 不同周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应性不一,一般选用6~8 周龄,小于5 周或大于10 周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应不稳定。 二、应用EL-4 CTLL检测IL-1生物学活性 |