端 粒 长 度 和 端 粒 酶 活 性 的 分 析

基 本 方 案 I Southern 杂 交 检 测 传 统 凝 胶 电 泳 中 末 端 端 粒 D N A 限制性片段(TRF) 的端粒长度

材 料

基 因 组 D N A (试剂盒分离）

和 限 制 性 内 切 核 酸 酶 和 反 应 缓 冲 液
琼 脂 糖（D N A 级）

1 〇 X T B E 或 T A E
6 X D N A 上样缓冲液

I k b 间隔的 D N A 梯度条带

l O m g /m l 溴化乙锭

变性缓冲液

T E

中和溶液

Q u i c k H y b 杂交溶液

γ ³²P -(C C C T A A )4 末端标记端粒探针（见辅助方案 1)

加入 0.1% (m /V ) S D S 的 5 X 和 2 X S S C

四 甲 基 氯 化 铵（T M A C l )

凝胶电泳设备和电源

紫外光和相机

刹刀片

3M M 纸

塑料膜

干胶仪或相应设备

振荡平板

玻璃杂交管

杂交炉或 43°C水浴

磷光显像系统或相应设备

图像分析软件

1 . 按标准步骤从细胞或组织中分离基因组 D N A 。

2 . 用Hinfi和 RasI限 制 性 内 切 核 酸 酶 各 自 10〜50U 消 化 1〜5ug g D N A ，总 体 积 50〜100ul， 37°C 孵育至少 4 h 或过夜。荧光仪检测消化的 D N A 浓度，或溴化乙锭点测验(见 C P I 附 录 3L )