免疫酶标技术—ABC法卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法

抗体

PBSH2O2血清DAB苏木精

显微镜

1.  标本固定后，PBS洗涤；

2.  1 %H₂O₂（或1 %H₂O₂甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；

3.  PBS洗2×3 分钟；

4.  正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；

5.  滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；

6.  PBS洗3×3 分钟；

7.  滴加二抗，室温30 分钟；

8.  PBS洗3×3 分钟；

9.  加ABC液（A与B液等量，于用前30 分钟混合），室温60 分钟；

10.  PBS洗；

11.  0.04 %DAB+0.03 %H₂O₂显色5～10 分钟；

12.  充分水洗；

13.  苏木精复染、封片、镜检。

在各种免疫细胞化学技术中，都需要注意的是：

1.  在整个染色过程中，标本不能干燥，各步骤之间应充分洗涤。

2.  上述各项方法操作简繁不等，快慢不一，敏感性、特异性也有不同，成本费用有高有低。

3.  在实验中选用哪种方法，主要取决于实验目的和实验室条件。

4.  为了取得可靠的结果，应严格设置阳性对照和阴性对照，如果出现假阴性或假阳性以及背景染色过深等问题时，应从标本质量、一抗及其它试剂的质量、稀释度及操作步骤等方面分析和寻找原因，并有针对性地加以解决和克服，即会取得满意效果。