1. 观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征,并按实验一菌落特征描述的方法记录结果。 2. 血液琼脂培养基的制备:
(1)成分pH7.6肉膏蛋白胨琼脂培养基10 ml,无菌脱纤维羊血(或兔血)1 ml。
(2)将肉膏蛋白胨琼脂培养基加热溶化。
(3)待冷至45℃时,以无菌操作加1 ml 无菌脱纤维羊血于培养基内,立即摇荡使血液和琼脂培养基充分混匀。
(4)迅速以无菌操作倒入平板,使成血液琼脂平板,注意不要产生气泡。
(5)置37℃过夜,如无菌生长即可使用。
(6)将无菌的平板取出进行划线接种分离单个菌落,因要保持琼脂表面完整,接种改用圆头光滑玻棒,注意不要把琼脂划破。接种后,倒置于37℃温室中培养,次日观察结果。如有单独菌落出现,即可进行下项实验。
3. 细菌菌落制片
(1)细菌菌落印取选择一个较小的单独菌落,用小刀将菌落周围约10~15 mm 的正方琼脂切下,将此琼脂块上长有菌落的一面朝下,轻放在盖玻片上,然后连同琼脂块将盖玻片小心放于Bouin氏固定液中约1小时,直至琼脂完全变为白色后取出,将琼脂小心剥去,剥时注意勿损伤菌落,仅使菌落留下,附着在盖玻片上。
(2)用细水流轻轻冲洗附有菌落的盖玻片。
(3)用0.01%结晶紫染液染色3分钟后水洗,吸干。
(4)脱水将盖玻片置于由低浓度到高浓度的酒精中(35%、50%、60%、70%、80%、95%、100%)各5分钟,但在100%酒精中浸15分钟。
(5)透明取出经过脱水的盖玻片,再放入二甲苯中2分钟。
(6)封固从二甲苯中取出盖玻片,用软纸拭去菌落周围的二甲苯。随即加一小滴加拿大乳胶于一洁净载玻片的中央,迅速反转盖玻片,轻轻地放在载玻片上,使加拿大乳胶铺满盖玻片,注意不要产生气泡,如果有气泡即轻轻压出。用低倍显微镜观察其菌落特征。待乳胶完全干燥,一二天后装木匣内保存。
4. 结果
将观察到的微生物菌落特征填入下表中。 展开 |