细菌的生长曲线测定实验对于(1)细胞生长过程监控(2)细胞生长时态的观察等都有重要意义
实验方法原理 | 将一定数量的细菌,接种于适宜的液体培养基中,在适温下培养,定时取样测数,以菌数的对数为纵坐标,生长时间为横坐标,作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期,各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。 比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比,与透光度成反比关系,利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值),用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。 实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理,以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。 |
---|---|
实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、实验器材 1. 活材料:大肠杆菌(E.coli)。 2. 培养基和试剂:牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10 mL),浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。无菌酸溶液(甲酸:乙酸:乳酸=3:1:1)。 3. 器材:1 mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。 二、实验步骤 1. 接种 2. 培养 3. 比浊 4. 可选步骤 将大肠杆菌接入装有牛肉膏蛋白胨培养液的小试管中(试管要能插入放比色杯的比色槽内)。37℃下振荡培养,分别在0、1.5 、3、4、6、8、10、12和14 h取出,以未接种培养液调零点,在光电比色计上比色。比色时应自制一个暗盒将培养管和比色槽罩住,以形成一个暗室。 三、绘制曲线 以细菌悬液的光密度值(OD)为纵坐标,培养时间为横坐标,给出大肠杆菌在正常生长、加酸处理和加富培养三种条件下的生长曲线。 如果我们将上述培养0,1.5,3,4,6,8,10,12,14h的细菌悬液用稀释平板测数法进行测数,测出不同时间的含菌数,以菌悬液比浊的光密度值为横坐标,以细菌的数量为纵坐标,绘制一标准曲线,这样在测得了任一培养时间的菌悬液光密度值后,就可以在此标淮曲线上查出含菌数。这种方法已在工业上广泛采用,它可以节省许多稀释平板测数的时间, 直接用比浊法测得的光密度值查标准曲线以了解各个培养时期的菌数消长情况。 展开 |
注意事项 | 1.细胞生长需要在适宜的温度和PH值下,每个细菌的生长条件不同,需要对不同种类的细菌进行不同条件的处理。
|
其他 | 如果我们将上述培养0,1.5,3,4,6,8,10,12,14h的细菌悬液用稀释平板测数法进行测数,测出不同时间的含菌数,以菌悬液比浊的光密度值为横坐标,以细菌的数量为纵坐标,绘制一标准曲线,这样在测得了任一培养时间的菌悬液光密度值后,就可以在此标淮曲线上查出含菌数。这种方法已在工业上广泛采用,它可以节省许多稀释平板测数的时间, 直接用比浊法测得的光密度值查标准曲线以了解各个培养时期的菌数消长情况。 |