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取磷酸盐蛋白琼脂11ml加热溶解,待冷却至50 ℃倾入已灭菌的7.5 cm直径的平皿中。 待凝固后,放入37℃温箱约一小时使培养基表面干燥。 镊取小圈滤纸片浸于白喉抗毒素中(注意取出时滤纸上剩余液体应使流去),然后将含有抗毒素的圆滤纸片置平板中央。 于距离小圆滤纸片边缘6-8mm处,接种数株待检白喉棒状杆菌培养物,接种面积约等于小圆滤纸片的大小(接种菌量宜多一些)。 置37 ℃孵育24-48h,阳性者于小圆滤纸片与培养物之间出现一条白色沉淀线。
如待检菌株有毒力则与含白喉抗毒素的滤纸片之间出现一条清晰的白色沉淀线;如设有阳性对照,则此沉淀线往往与阳性对照株的沉淀线相吻合。