人胰腺癌裸小鼠模型的建立用于:(1)胰腺癌的诊断;(2)胰腺癌治疗的研究;(3)观察胰腺癌细胞株在移植前后形态学是否发生变化。
实验方法原理 | 将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下,每周测量肿瘤大小,第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查,放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养,HE染色。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、实验材料准备 二、人胰腺癌细胞株8988 体外传代培养 1. 将人胰腺癌细胞株放入含10 %的RPMI-1640 完全培养基中,置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中,每2d 换液1次,2~3d,0. 25 %的胰酶消化,一传3 传代培养。 三、血清学检测 第6 周时拔眼球法处死小鼠,收集血液于试管中,静置取血清,检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。 四、巨检 1. 处死裸鼠后,皮下剥离肿瘤,记录质地、浸润、血供情况,观察有无腹腔粘连,各脏器转移状况。 五、病理学检测 上述标本常规石蜡包埋切片,HE 染色,光镜观察。 六、超微结构观察 肿瘤组织2.5%戊二醛,1 %锇酸双固定,包埋,超薄切片,铀铅双重染色,透射电镜观察。
七、镜检 1. 肿瘤组织细胞培养及活细胞观察:取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织,PBS 漂洗3 次,剪成1 m3 大小,0. 25 %的胰酶消化,去除粗大组织后,制成单细胞悬液,置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养,倒置显微镜下观察其形态、生长情况等, 并与细胞株8988 进行比较。 |
注意事项 | 1.要设计不同的实验组和对照组, 每组动物数一般为 5-10 只; 2.一般接种肿瘤6-8 周后,小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时, 可眼球取血,分离血清并保存血清, 处死小鼠, 取肿瘤组织照相, 取部分肿瘤组织作 冰冻组织切片( 或- 80℃ 保存), 作相应的免疫组织化学染色 , 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定, 石腊包埋, 作常规HE 染色。 |
其他 | 一、实验讨论 胰腺癌是恶性程度高、发展快、预后极差的肿瘤,早期症状不典型,至出现明显症状时,多已进入晚期,失去了根治机会。对传统的放、化疗不敏感,即使是成功地实施了手术的病人,由于术后易转移,5 年生存率仅接近20% 。
本研究结果显示,人胰腺癌细胞株8988 接种后,潜伏期短(5~7 d) ,生长良好,成功率高(95 %),且方法简单,易于操作,生物学特性保持较好。而且由于肿瘤生长在皮下,非常容易观察实验药物的疗效及肿瘤大小的变化,可用于胰腺癌药物的疗效研究。GOLD David V 等用荷人胰腺癌裸鼠做放射免疫治疗实验,取得了较好的结果。 展开 |