重组染色质装配反应中的核心组蛋白与 DNA 比率的滴定
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 按照基本方案 6 步骤 1～6 操作。 要得到真实浓度的近似值，DNA 的浓度由 A260 值计算得到，组蛋白的浓度通过 BCA 分析系统来确定。 2. 按如下所述进行 5 个装配反应： 2.1 在 56.6 ul NH 中（见基本方案 6 步骤 3）加入 1 ul ACF（2～10 U）。 2.2 从冰上取下管子，平衡到室温。 2.3 加入 10.5 ul AM 主混合液（见基本方案步骤 4），及 2.5、2.22、2.0、1.82、 1.67 ul DNA 模板（使用过量的拓扑异构酶Ⅰ变松弛或超螺旋的；见基本方案步骤 5）。马上轻轻地涡旋混匀 2～3 S。 2.4 27℃ 装配 1.5～2.5 h。 3. 按照基本方案步骤 8～12 操作。 4. 从凝胶上分析确定组蛋白与 DNA 最高量的比值，这时仍然能观察到未弥散的梯度。使用下一个最低的比值作为进行进一步装配反应的最理想的比值。重新计算核心组蛋白的有效浓度以使新的最佳比值为 1.0：1。 展开 |
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