一、 实验试剂:
1. 纯化氯仿:250ml 2. 纯化正丁醇: 25ml
3. 无水硫酸氨:50g 4. 盐酸苯肼:65mg
5. 皮质醇标准:2ml 6. 56%硫酸:分析纯
7. 浓盐酸:分析纯
二、实验试剂配制:
1. 氯仿正丁醇混合液,按体积比10:1配制。
2. 56%硫酸:体积比
3. 苯肼-硫酸试剂:取盐酸苯肼65mg加人56%硫酸100ml加NaCL 2g 冰箱中可保存二个月。
4. 标准管:每管加0.1ml标准液置室温中干燥,盖紧放暗处保存,每次取一管使用。
三、实验测定方法:
l. 标本收集:收集24小时尿液于干洁容器内(留第一次尿应加浓HCL 5ml 防腐)量其总体积50ml样品送检。
2. 提取:取尿液3ml于50ml带塞烧瓶中,加入56%硫酸0.1ml和无水硫酸按2.5g轻摇使其溶解,加入氯仿正丁醇混合液15ml加塞振摇3分钟,将内物倒入尖底离心管内,以1500转/分离心10-15分钟,吸去上层尿液.留下氯仿正丁醇提取液备用。
3. 显色。取带塞洁净试管按下表操作:
各管用力振摇2min静止30min(或1500转/分离心15min)将上层(硫酸苯肼混合液)分别吸人洁净管内。置56℃水浴中25分钟。取出后在410nm波长用0.5cm光径比色杯,以比色空白管调零,读取各管光密度值。 四、计算:
17-羟类固醇(mg/24h)=(A-B)/C×0.02×总尿量
正常范围:男性:5-14mg/24小的尿
女性:4-14mg/24小时尿 展开 |