一、 实验试剂:
1. 底物缓冲液(含0.3mol/L乳酸,PH8.8):
称取二乙醇胺2.1g,加蒸馏水约80ml,以1mol/L盐酸调节至PH8.8,加水至100ml。
2. 11.3mmol/L NAD溶液:称取NAD15mg(含量为70%,则称取21.4mg)溶于2ml蒸馏水中,4℃保存至少可用2周。
3. lmmol/L 2,4-二硝基苯肼溶液:称取2,4-二硝基苯肼198mg加10mol/L盐酸100ml,待溶解后加蒸馏水至1000ml,置棕色玻璃瓶,室温中保存。
4. 0.4mol/L NaOH溶液
5. 0.5mmol/L丙酮酸标准液:准确称取丙酮酸钠(标准品级MW=110.06)11mg,以底物缓冲液溶解后,移入200m1容量瓶,加底物缓冲液稀释至刻度,临用前配制。
二、 实验操作:取16mm×100mm试管,按表操作 ![](https://i4.antpedia.com/attachments/att/image/20190413/1555133092115382.jpg)
室温放置5分钟后,波长440 nm,比色杯光径 1.0 cm,用B溶液调零,读取各管吸光度,并与相应的酶活力单位数绘制标准曲线。
金氏单位定义:以100 ml 血清,37℃作用15 min,产生1微摩尔丙酮酸为一个单位。
参考值:190 - 437 金氏单位 展开 |