实验概要
小鼠胚胎成纤维细胞传代培养
主要试剂
0.05%Trypsin、细胞基础培养液、DPBS
主要设备
100 mm培养皿、15 mL离心管、倒置显微镜
实验步骤
(1)预先37℃温热细胞基础培养液及0.05%Trypsin。
(2)用枪头吸弃培养皿中的培养液,并用DPBS冲洗一遍,然后加入2 mL 0.05%Trypsin(100 mm培养皿),37℃培养箱内孵育3min。
(3)显微镜下观察细胞变圆、漂起,可加2 mL细胞基础培养液终止消化。
(4)将细胞转移到15 mL离心管中,室温1000 r/min离心3 min,去上清。
(5)用6 mL细胞基础培养液重悬细胞,按1:3比例接种至新的培养皿,补充培养液到100 mm培养皿,一般100 mm培养皿8 mL液体。
!注意:1. MEF传代时密度应适当,不能过密,也不能过稀,密度适当的MEF可以按照1∶3的比例进行传代。
2. 因为小鼠细胞易老化,制备饲养层细胞要求使用前三代的细胞。