实验概要
mESCs体内畸胎瘤形成和苏木素-伊红染色
主要试剂
mESCs培养液A或者B、无水乙醇、二甲苯、石蜡、4% PFA、伊红染液、苏木素染液、浓盐酸、中性树胶
主要设备
35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、细胞计数板、手术剪、载玻片、切片机、包埋机、烘箱、倒置显微镜
实验步骤
（1）取1～2个培养皿（35 mm）的ES细胞，采用小鼠ES细胞传代的方法将细胞消化成单细胞悬液，转入无菌离心管中。
（2）加0.1～0.2 mL DPBS重悬，使细胞密度为0.5～1×107细胞/mL。
（3）取SCID小鼠，腹股沟注射（或腹腔注射）细胞悬液，每只鼠注射1×107个细胞。
（4）饲养小鼠，两周后腹股沟可见肿块。4～5周后处死小鼠，剥离肿块，即畸胎瘤。
（5）对畸胎瘤进行切割，体积小于 5×5×2mm，放入组织盒中,4%PFA对切割好的畸胎瘤块进行4℃过夜固定。
（6）首先用70% 乙醇脱水 1 小时（时间可以更长）；然后依次在80% 乙醇，90% 乙醇I，90% 乙醇II ，100%乙醇 I，100%乙醇 II 中各脱水1 小时。
！注意:此时可以预热蜡箱。
（7）将脱水后的组织放在二甲苯 I中半小时；放在二甲苯 II 中半小时；放在二甲苯：石蜡（1：1）中半小时进行透明处理。
！注意:透明的时间要非常准确。
（8）将透明处理过的组织在溶解好的石蜡I中放置2 小时；然后在石蜡II 中放置2 小时。此时的浸蜡是在65℃的蜡箱中进行。
（9）取出组织盒中的组织块，放入大小合适的蜡槽中。在包埋机中接蜡将组织块包埋。
（10）包埋好的组织块连同蜡槽开始冷却，直至蜡汁凝固。
（11）首先取出蜡槽中凝固好的包埋有组织块的蜡块，对蜡块边缘进行修整。将修好的蜡块固定在切片机上开始切片。
（12）小心地将切好的组织片放入事先准备好的水中，待组织片完全展开后，小心地将其贴到载玻片上，做好标记后放入37℃的烘箱中进行过夜烤片。
（13）将烤好的玻片浸入二甲苯I溶液中15min，再浸入二甲苯 II溶液中15min。然后梯度酒精入水（100%酒精----90%酒精----80%酒精----70%酒精----50%酒精---蒸馏水，每步各 5min）。
！注意: 脱蜡步骤应彻底，否则无论进行哪种染色都会发生困难。
（14）将玻片放入苏木素水溶液中染色 5min。
！注意:时间过长核着色会非常深,要严格控制时间。
（15）将染色后的玻片放入0.1%盐酸溶液（70%乙醇稀释浓盐酸至0.1%）中1~2s。
（16）然后放在水流下冲10min，不要直冲，倾斜着使水流能流过玻片。
（17）将冲洗过的玻片分别放在70% 和90% 酒精中脱水各5 min。
（18）脱水后的玻片放入伊红染液中染色10min。
!注意：伊红宜淡染，复染过深则导致细胞核不清晰，影响镜检.
（19）再用无水乙醇浸泡2-3min，起到透明作用，使得核与胞质分别明显。
（20）最后用中性树胶封固，观察。
!注意：封固剂要适量，滴加时要小心倾滴，盖玻片要轻轻放置，以免气泡产生影响镜检；染好的切片应妥为保存，更应避免日光照射，否则切片容易褪色。
（21）观察内、中、外三胚层结构（有上皮细胞，骨骼肌细胞，神经细胞，成纤维细胞，心肌细胞等；在切片中也可看到属于各胚层的组织分化，如：神经纤维，角质化的复层扁平上皮，肌肉组织，软骨、硬骨，各种上皮组织，腺腔、神经管等。
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