肌糖原的酵解作用

一、实验目的
（1）学习检定糖酵解作用的原理和方法。

（2）了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。

二、实验原理  
在动物、植物、微生物等许多生物机体内，糖的无氧分解几乎都按完全相同的过程进行，本实验以动物肌肉组织中肌糖元的酵解过程为例。肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的肌糖元首先与磷酸化合而分解，经过己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系列中间产物，最后生成乳酸。该过程可综合在下列反应式：

1/n（C₆H₅O₅）_n＋H₂O→2CH₃CHOHCOOH

                糖元                            乳酸

肌糖元的酵解作用是糖类供给组织能量的一种方式。当机体突然需要大量的能量，而又供氧不足（如剧烈运动时），则糖元的酵解作用暂时满足能量消耗的需要。在有氧条件下，组织内糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化则为糖代谢的主要途径。

糖元酵解作用的实验，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜时，必须在无氧的条件下进行；而肌肉提取液，则可在有氧条件下进行。因为，催化酵解作用的酶系统全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用（即三羧酸循环）的酶系统，则集中在线粒体中，糖元可用淀粉代替。

三、试剂与器材 
试管、恒温水浴、沸水浴、水浴、研钵、玻璃器皿等。0. 5%糖元溶液（或0.5%淀粉溶液）、液体石蜡、15%偏磷酸溶液、氢氧化钙（粉末）、浓硫酸、饱和硫酸铜溶液。1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH8.0）。1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液（pH7.4）、对羟基联苯试剂；

四、操作方法处 
死动物→制备肌肉糜→肌肉的糖酵解→乳酸的测定

五、关键步骤与注意事项

① 动物处死后，应立即进行实验，防止酶失活。

② 测定时所用的仪器应严格洗涤干净。