实验概要
学习测定红细胞渗透脆性的方法,理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。
实验原理
正常红细悬浮于等渗的血浆中,若置于高渗溶液内,则红细胞会因失水而皱缩;反之,置于低渗溶液内,则水进入红细胞,使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降,红细胞会因继续膨胀而破裂,释放血红蛋白,称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力,这一特征称为红细胞的渗透脆性。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大,红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血,即红细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同的低渗溶液中,可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗溶液浓度,为该血液红细胞的最小抵抗力;出现完全溶血时的低渗溶液浓度,则为该血液红细胞的最大抵抗力。
生理学上将与血浆渗透压相等的溶液称为等渗溶液;而将能维持红细胞正常形态、大小和悬浮于其中的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液(如1.99%的尿素溶液),但等张溶液一定是等渗溶液。
主要试剂
1%肝素,1%氯化钠溶液,蒸馏水。
主要设备
10 ml小试管,试管架,滴管,1 ml移液管。
实验材料
兔
实验步骤
1.溶液配制:取10个小试管,配制出10种不同浓度的氯化钠低渗溶液(0.25%,0.3%,0.35%,0.4%,0.45%,0.5%,0.55%,0.6%,0.65%,0.9%)。 详见下表:
编 号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
1%NaCl | 1.4 | 1.3 | 1.2 | 1.1 | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 |
蒸馏水 | 0.6 | 0.7 | 0.8 | 0.9 | 1.0 | 1.1 | 1.2 | 1.3 | 1.4 | 1.5 |
NaCl % | 0.7 | 0.65 | 0.6 | 0.55 | 0.50 | 0.45 | 0.40 | 0.35 | 0.30 | 0.25 |
2.制备抗凝血 不同动物采血方法各有所异,但多采用末梢血.将血滴在有1%肝素的表面皿上,混匀(1%肝素0.1 ml可抗10 ml血)。
3.加抗凝血:用滴管吸取抗凝血,在各试管中各加一滴,轻轻摇匀,静置1~2 h。
4.观察结果:根据各管中液体颜色和浑浊度的不同,判断红细胞脆性。
①未发生溶血的试管:液体下层为大量红细胞沉淀,上层为无色透明,表明无红细胞破裂。
②部分红细胞溶血的试管:液体下层为红细胞沉淀,上层出现透明淡红(淡红棕)色,表明部分红细胞已经破裂,称为不完全溶血。
③红细胞全部溶血的试管:液体完全变成透明红色,管底无红细胞沉淀,表明红细胞完全破裂,称为完全溶血。
注意事项
1. 混匀时,轻轻倾倒1~2次,减少机械震动,避免人为溶血。
2. 抗凝剂最好为肝素,其他抗凝剂可改变溶液的渗透性。
3. 配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。NaCl溶液的浓度梯度可根据动物的实际情况适当进行调整。