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蛋白质测定仪测定动物肉样蛋白质含量的详细情况

2019.4.30
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

动物肉样常规理化检测中的重要指标之一是蛋白质含量,对于蛋白质含量的测定,一般可以 采用凯氏定氮法这种经典方法测定。那么其测定的原理是什么呢?其实蛋白质是一种含氮的有机化合物,将动物体肉样与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸钱。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。在现代的测定过程中可以采用蛋白质测定仪进行准确科学的测定。

样品的制备测定动物体肉样中的蛋白质,涉及到取风干样还是鲜样测定的问题。畜体刚屠宰后,水分会随体温的下降而散失,所以测定应在畜体刚宰杀后取鲜样进行。如果要测定肉样中的其他成分,可按照以卜方法处理样品:在动物屠宰后立即采样进行粉碎,分作两部分,一部分装入棕色瓶中,贴上标签冷贮保存,用以测定蛋白质含量;另一部分立即测定干物质含量m。用鲜肉样测定蛋白质,可减少因水分散发和制干物质过程的误差,且可减少做干物质的量,减轻工作负担。样品的用量,GB/T14771-932中规定固体样品0.20g,半固体样品2g,液体样品10-20ml可根据被测样品粗略估算其蛋白,按含氮量30-40mg确定取样量。

样品消化用称量纸精密称取一定量样品,移入干燥的消化管中,加入0.2g硫酸铜和3g硫酸钾(可按比例称取一定量,混合后研磨备用)。有人建议用0.5g硫酸铜和巧g硫酸钾,但实际操作起来表现为消化速度缓慢,且常常因硫酸钾用量过大而造成结晶现象。有人尝试在上述两种试剂的基础上增加Se[3],或用氧化汞取代硫酸铜来提高消化速度,并证明了方法的可行性。然而,Se粉和氧化汞是有毒物质,消化时放出的气体会对环境造成污染。接着加20ml浓硫酸,这是国标法规定的用量,但消化速度缓慢,特别是对于肉类食品。肉中的赖氨酸和组氨酸会使消化速度延长[m0据沈建明等咐民道,蛋白质中总氮的消化速度为7.6h,猪肉的总氮约为2.4%,按国标法称取1.500g(36mgI)鲜肉样进行消化需 4.7h才能消化完全。用HZOZ来提高消化速度的实验已由多人得到证实。笔者通过实验,证明用H202H2S04=32林积E,添加量为15ml可有效 提高消化速度,且结果准确。

装好定氮装置,于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处,加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,并检查其气密h。量取硼酸溶液于锥形瓶中作接收液。硼酸溶液的浓度和用量有多种说法。 GB/T5009.5-1985[8]10mL。但是此量偏少,可能无法完全吸收逸出的氨气。应增加硼酸溶液的用量。有实验证明,适当增加硼酸溶液的 用量不会对结果造成影响。

蛋白质测定仪用 以检验操作步骤精密度,国标上没有对此作要求,但作为科研需要和力求结果准确的要求,有必要进行回收率试验。另外,刘厚渊m用回收率试验问接标定盐酸标准溶液浓度,具有省时、省标准溶液的优点。精确称取0.5g硫酸钱,代替试样按以上进行测定,含氮量计算公式与测粗蛋白的计算公式相同,但不乘以6.25, 测得硫酸钱含氮量应为21.19}.2%o回收率按以卜公式计算:R=N/21.19X100%,式中:R代表回收率,N代表实测含氮量。每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。当粗蛋白百分含量大于25%,允许相对偏差为1%;粗蛋白含量大于1%,但小于等于25%时,允许相对偏差为 2%;当粗蛋白含量小于等于10%时,允许相对偏差为3%


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