临床细菌检验工作的基本要求和技术
对临床细菌检验人员的要求
1. 负责鉴定及签发报告的主管技术人员应通晓诊断细菌学的全面知识。
2. 一般细菌室工作人员均应具备3. 细菌传染、消毒、灭菌的知识。
4. 通晓细菌室守则,5. 并严格遵守。
6. 负责人应不7. 断更新知识,8. 了解细菌学检验的新进展。
9. 定期或随时与临床医师联系,10. 主动参与临床病例讨论,11. 了解病情及治疗情况,12. 达到细菌检验与临床的密切13. 联系。
14. 工作人员应定期进行健康体检及必要的预防接种,15. 增强自身抵抗能力。
二、工作人员守则
在细菌室工作人员应注意,既不要给室内带来污染,也不要被室内的微生物感染。工作人员必须遵守以下规则:
穿专用的工作衣、帽入室;必要时应戴口罩。
不允许无关人员进入实验室。
室内禁止饮食、吸烟、闲谈等非专业活动。
养成在室内手不触及口、脸、头发及躯体的习惯。
操作中不可说话,以免口中飞沫污染标本。
每次完成工作和离开实验室前,应用肥皂洗手,接触了致病菌类,须用消毒剂消毒手。
个人物品不许带入室内。
当工作环境被细菌培养物污染,必须用适当的强消毒液泼撒覆盖污染物,并报告主管人员采取必要的措施。
工作人员被细菌培养物污染,应用弱或中等消毒剂清洗,必要时应给予药物治疗,并向主管负责人报告,进一步采用特殊措施。
基本染色方法
染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时,用接种环沾取菌液点在载玻片上,标本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时,先取生理盐水 1滴,置玻片上,用接种针挑取菌落,在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式,或造成细菌鞭毛脱落,影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥,并经火焰固定,固定温度不宜过高,以玻片背面接触手背不烫为准,否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法,可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
试剂
1. 结晶紫溶液
A液: 结晶紫 2g
95%乙醇 20ml
B液: 草酸铵 0.8g
蒸馏水 80ml
需在用前24h将A液、B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。
2.碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升水,使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水,先将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。
3.脱色液:95%乙醇。
4.复染液
A. 贮存液: 沙黄 2.5g
95%乙醇 100ml
B. 应用液: A液 10ml
蒸馏水 90ml
染色方法:
1.涂片经火焰固定,加结晶紫液染1 min,清水冲去染液。
2.加碘液染l min,水洗。
3.加脱色液,不时摇动约10~30s,至无紫色脱落为止,水洗。
4.加复染液,染30s,水洗。
5.干后镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时,可以适当增加标本涂片的厚度,以提高检出率。染厚涂片时,须掌握复染色时间。如果背景过深,影响镜检。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性,取培养菌落涂片染色时,呈现两种现象,视野中有些菌细胞阳性,另外一些则阴性;有时同一个菌体上,红色的深浅亦有不同,观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法:① 碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。 ② 荧光染料金胺O法(也称金胺O-罗丹明B法)。
碱性复红染色法
试 剂
1.萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液 10ml
5%石炭酸溶液 90ml
2.脱色剂 *
浓盐酸 3ml
95%乙醇 97ml
3.复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液 30ml