PCR扩增法
实验方法原理 |
大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。 多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特定基因的过度表达。 |
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实验材料 | RNA |
试剂、试剂盒 | PBS 氯仿 异丙醇 萘酸 异硫氰酸肽 十二烷基肌酸钠 构橼酸钠 乙酸钠 二疏基乙醇 乙醇 Taq酶 |
仪器、耗材 | 离心机 紫外分光光度计 琼脂糖凝胶电泳 PCR仪 |
实验步骤 |
一、细胞总RNA提取
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注意事项 |
1. 尽可能在低温下操作; 2. 适量斟酌Trizon等的用量; 3. 在每一次离心后除尽蛋白质、不溶物 提取操作时必须戴手套、口罩等防止DNA酶的影响; 4. 注意Trizon带有腐蚀性; 5. 最重要的就是防止DNase的污染,手套、口罩必不可少,所用的枪头和EP管等也要RNA提取专用的,无DNA酶的。
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