印迹法
碱性缓冲液法
向下毛细管转移法
电转印法
实验方法原理 | 本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的,稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。 |
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实验材料 | DNA |
试剂、试剂盒 | HCl NaCl Tris NaOH SSC 溴化乙锭 |
仪器、耗材 | 电泳仪 紫外透射仪 |
实验步骤 |
一、向上毛细管转移法的转移叠层系统:
图一、向上毛细管转移法的转移叠层系统,A表示海绵法,B表示滤纸桥法 二、实验步骤 1. 用适当的限制性内切酶消化DNA,与合适的DNA分子量标准一起进行琼脂糖凝胶电泳。
3. 按如下方法处理凝胶,室温下轻轻摇动,要确保凝胶被完全覆盖。
4. 如图一所示安装转移叠层系统,其各层组成依次为
5. 将一块玻璃平板放于叠层上面,其上加一重0.2~0.4 kg 的重物以使各层固定,放置过夜。
6. 取出杂交膜,用铅笔在膜上标记样品孔的位置,井切去一角以标示方向。
7. 用2×SSC漂洗杂交膜,然后将其放在一张Whatman 3 MM 滤纸上,使其完全干燥。
9. 膜干燥后可夹在2张Whatman 3 MM 滤纸之间,室温下放置数月。
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