实验方法原理 |
带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。核酸电泳是进行核酸研究的重要手段,是核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可或缺的组成部分。核酸电泳通常 在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行,浓度不同的琼脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子筛网孔大小不同的凝胶,可用于分离不同分子量的核酸片段。 |
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实验材料 | DNA样品 |
试剂、试剂盒 | 琼脂糖干粉 电泳缓冲液 载样缓冲液 |
仪器、耗材 | 三角烧瓶 微波炉 电泳仪 电泳槽 |
实验步骤 |
1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子; 2. 根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般20~30 ml) ; 3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染料,轻轻旋转以充分 混匀凝胶溶液,倒入电泳槽中,待其凝固; 4. 室温下 30~ 45 分钟后凝胶完全凝结, 小心拔出梳子, 将凝胶安放在电泳内槽; 5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶面 1mm 为宜,如样品孔内有气 泡,应设法除去; 6. 在 DNA 样品中加入 10×体积的载样缓冲液(loading buffer) ,混匀后,用枪 将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内; 7. 接通电源,红色为正极,黑色为负极,切记DNA 样品由负极往正极泳动 ( 靠近加样孔的一端为负) 。一般 60~100V 电压,电泳 20~40min 即可; 8. 根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳; 9. 电泳完毕,关上电源,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子 量标准 Marker 比较被扩增产物的大小。
展开 |
注意事项 |
制胶时需均匀融胶,避免影响后续跑胶结果。
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其他 |
除去琼脂糖核酸电泳之外,还可以进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,后者适用于寡聚核酸的分离。
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