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电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验

2019.9.13
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184****5725

致力于为分析测试行业奉献终身

           

实验材料

冻干的纯化蛋白样品

试剂、试剂盒

甲酸 氢溴酸 过氧化氢 NaOH 固体

仪器、耗材

旋转蒸发器 小试管

实验步骤

1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中,在室温下放置让,将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。

2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。

3.在预冷的小试管中,将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中(500ug/ml)。

4.盖上帽子,0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白质不溶,把反应延长到 20 h。

5.加入 30ul 氢溴酸,去除多余的过甲酸。

要特别小心,可能会释放出来少量的溴。

6.用旋转蒸发器或离心冷冻干燥机彻底干燥样品。在浓缩器中加入少量的 NaOH 固体,以去掉多余的溴和甲酸。蒸发干燥约需要 10 min。

由于许多氨基酸被修饰,推荐用过甲酸氧化的蛋白质用于 S—S/S—H(半胱磺酸)和甲硫氨酸基团(甲硫氨酸砜)的定量分析,而不是序列分析。

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