消化培养法
组织块培养法
实验方法原理 |
合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细胞从培养液中摄取营养和排出代谢产物,细胞能较快地长成单层。 本法尤适用于培养大量组织,细胞产量高;但用于经常性小量培养工作稍显繁琐,无菌操作不良时且易污染。 |
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实验材料 | 组织 |
试剂、试剂盒 | Hanks 培养液 胰蛋白酶 |
仪器、耗材 | 吸管 平皿 培养瓶 烧杯 搅拌器 三角烧瓶 不锈钢筛 眼科剪 眼科镊 计数板 |
实验步骤 |
1. 准备
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注意事项 |
组织块、胰蛋白酶、培养液等易受紫外线伤害的物品,最好在培养时再携入操作野;如预先置入,需用纸张覆盖,以免受射线影响;开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部(工作时宜挽上袖口)。
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其他 |
最常用的初代培养有组织块培养和分散细胞培养。组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性最好的游离细胞,经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物,或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+,再经机械轻度振荡,使之成为单细胞。 展开 |