基本方案
实验方法原理 | 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromodeoxyuridinc简称BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物。人体淋巴细胞在含有BrdU的培养液中进行DNA复制时,BrdU可专一替代胸腺嘧啶核苷,而掺入到新复制的DNA核苷酸链中。因此只要通过两个复制周期,就可使姊妹染色单体中一条单体的DNA链中,有一股链是掺入BrdU的,而另一条单体的DNA双链,两股链全掺入BrdU。由于双股都含有BrdU的DNA分子构形有变化,使这条染色单体对某些染色剂的亲合力降低,用Giemsa染液染色时就可清楚看到双股都含BrdU的DNA链所组成的单体着色浅,而另一条单体着色深。这样就可利用这一技术检查同一染色体的两条姊妹染色单体互换(SCE)的情况。现已证明,许多致突变剂和致癌物质可诱发姊妹染色单体互换和诱发染色体断裂、重排。对这些因素SCE要比染色体畸变敏感的多。因而检测姊妹染色单体交换频率是检查致癌和致突变剂的细胞生物学效应的一种新方法,它具有灵敏、准确、简便快速的优点。 |
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实验材料 | 人外周血 |
试剂、试剂盒 | BrdU溶液 SSC Giemsa染液 PBS |
仪器、耗材 | 紫外灯 恒温水浴箱 培养皿 擦镜纸 |
实验步骤 |
1. 培养液的制备、采血、培养等操作同常规染色体的制备。(见常规染色体标本制备方法)
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